大菱鲆疾病早期快速检测方法——胶体金免疫层析试纸的研制与建立
1. 中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室,青岛266071;
2. 河南省农业科学院,河南省动物免疫学重点实验室,郑州450002;
3. 青岛通用水产养殖有限公司,青岛 266404
下一篇 上一篇
摘要
使用成分单一的牛血清白蛋白(BSA)为模拟病原,以胶体金标记兔抗血清(即大菱鲆免疫球蛋白多抗)作为检测示踪物,并分别将BSA和葡萄球菌A蛋白印记到硝酸纤维素膜上制成检测线和对照线,通过一系列工艺创制与组装配套,首次成功制备了一套完整的大菱鲆抗体快速检测试纸。采用大菱鲆抗BSA血清作为阳性样本,以健康大菱鲆血清作为阴性样本,用以检验试纸的性能,并与酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测结果相比较。结果表明:本试纸检测抗体的特异性与敏感性均很高,与ELISA方法相当,而且使用方便,不需专业技能和额外的试剂与辅助仪器设备,5 min内即可用裸眼获得观察结果,很适合于基层生产操作及户外调研使用。以该实验为基础建立起来的抗体检测试纸,亦可推广应用于其他病害抗体的检测,可为鱼类疾病早期发生提供简易、快捷和操作性强的诊断方法。
参考文献
[ 1 ] 肖克字.水产动物免疫与应用[M].北京:科学出版社,2007.
[ 2 ] 张改平,郭军庆,李青梅,等.动物疫病免疫试纸快速检测技术概况[J].河南农业科学,2009(9):174-176. 链接1
[ 3 ] 王蔚芳,李青梅,郭军庆,等.胶体金免疫层析快速检测技术及其在水产养殖业中的应用前景[J],渔业科学进展,2010,31(3):113-118. 链接1
[ 4 ] 秦蕾,王印庚,阎斌伦,大菱鲆微生物性疾病研究进展[J].水产科学,2008,27(11):598-601. 链接1
[ 5 ] 朱立平,陈学清.免疫学常用实验方法[M].北京:人民军医出版社,2000.
[ 6 ] 魏鉴腾,陈吉祥,王淑斓,等.大菱鲆血清免疫球蛋白IgM的纯化及应用研究[J],中国海洋大学学报,2008,38(6):932一936. 链接1
[ 7 ] Warr G W.The immunoglobulins and the gones that encode them[J].Developmental&Comparutive Immunology.1995,19:1-12.
[ 8 ] Faulk W P.Taylor GM.An immunoolloid method for the clec-tron micrnscope[J].lmmunnchemistry,1971,8(1l):1081-1083.
[ 9 ] Anon K,Paulsen A Q.Tilley M B,et al.Use of electron micro-scopie and immunosold labeling techniques to determine polyoma-virus recombinant VPl capsid-like particles entry into mouse 3T6cell nucleus[J].Jourmal of Virological lethods,2000,90:91-97.
[10] Zhang L.Volknandt W.Gundelfinger E D,et al.A comparison of synaptic protein localization in hippacampal mosy fiber termi-nals and neurosecretory endings of the neurohypophysis using the cryo-inmunogold technique[J].Jourmal of Neuroeytology,2000,29(1):19-30. 链接1
[11] Brorson S H.A method for measurements of the efficieney of im-munogold labeling of epoxy-embedded proteins subjected to difer-ent retrieval techniques[J].Micron,2004,35:619-621. 链接1
[12] 张付贤,王兴龙。免疫胶体金技术影响因素分析[J].中国畜牧兽医,2009,36(5):199-202. 链接1