星突江鲽胰岛素样生长因子I的体外重组表达及生物活性分析

2015年第17卷第1期

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《中国工程科学》 >> 2015年第17卷第1期

星突江鲽胰岛素样生长因子I的体外重组表达及生物活性分析

1. 农业部海洋渔业可持续发展重点实验室，中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青岛 266071；

2. 上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306

资助项目：国家863计划项目(2012AA10A413)；鲆鲽类现代产业技术体系(CARS-50)；山东省自然科学基金项目(ZR2012CQ025) 收稿日期： 2014-06-20 发布日期： 2015-01-13 10:49:41.000

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摘要

为了在蛋白水平认识星突江鲽（Platichthys stellatus）胰岛素样生长因子I（IGF-I）的生长调控作用及机制，采用RT-PCR方法扩增了其成熟肽片段，利用原核表达载体pET-28a成功构建了重组星突江鲽IGF-I/pET-28a质粒，转化至大肠杆菌BL21（DE3）后经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的重组星突江鲽IGF-I蛋白。获得的重组IGF-I蛋白大小为12.1 kD，37 ℃下用0.5 mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导3 h时目的蛋白表达量最高，占菌体总蛋白的39.8 %，主要以包涵体形式存在。Western blotting免疫印迹表明星突江鲽IGF-I重组蛋白均可被6×His抗体特异性识别。包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后，可获得高纯度的IGF-I重组蛋白。细胞增殖试验结果显示0.6 μg/mL 的星突江鲽IGF-I重组蛋白能显著促进人胚胎肾细胞HEK293T的增殖而大于1.8 μg/mL时则表现出抑制作用。本研究成功构建了星突江鲽IGF-I体外高效表达系统，并获得具有细胞水平生物活性的星突江鲽IGF-I重组蛋白，结果可为深入探究IGF-I在星突江鲽生长发育中的作用机制及研制高效绿色的促生长制剂提供基础资料。

关键词

星突江鲽 ; 胰岛素样生长因子I ; 原核表达 ; 生物活性

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参考文献

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