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Effects of enucleation method on
Chengcheng ZHAO, Junsong SHI, Rong ZHOU, Ranbiao MAI, Lvhua LUO, Xiaoyan HE, Hongmei JI, Gengyuan CAI, Dewu LIU, Enqin ZHENG, Zhenfang WU, Zicong LI
《农业科学与工程前沿（英文）》 2019年 第6卷 第1期 页码 61-65 doi: 10.15302/J-FASE-2018227
Enucleation is a crucial procedure for mammalian somatic cell nuclear transfer (SCNT), especially for domestic animal cloning. Oocytes of domestic animals such as pigs and cattle contain dark lipid droplets that hinder localization and removal of the nucleus. Using an oocyte enucleation technique that can obtain a high enucleation rate but has minimal negative effects on the reprogramming potential of oocyte for cloning is beneficial for enhancing the outcome of SCNT. In this study, we compared the pig cloning efficiency resulting from blind aspiration-based (BA-B) enucleation and spindle imaging system-assisted (SIS-A) enucleation, and compared the pig SCNT success rate associated with BA-B enucleation and blind aspiration plus post-enucleation staining-based (BAPPS-B) enucleation. SIS-A enucleation achieved a significantly higher oocyte enucleation success rate and tended to obtain a higher full term development rate of SCNT embryos than BA-B enucleation. BAPPS-B enucleation also obtained significantly higher as well as full term development efficiency of cloned porcine embryos than BA-B enucleation. These data indicate that SIS-A and BAPPS-B enucleation are better approaches for pig SCNT than BA-B enucleation.
关键词： cloning enucleation pig SCNT
孟庆刚,朱士恩,曾申明,张忠诚
《中国工程科学》 2001年 第3卷 第11期 页码 65-69
论述了一种新的小鼠卵母细胞去核方法一一表面张力辅助去核法（STA),并同时与其他3种去核方 法（简称A法、B法、C法）进行比较。STA法是将卵母细胞核在固定管的辅助下，借助液体表面张力通过透 明带上的破口被挤出。经STA法去核的卵母细胞质体用于电融合介导的小鼠耳成纤维细胞核移植实验，结果有 76.1 %细胞与细胞质体融合形成重组胚，85.4 %的重组胚形成原核，49.4%卵裂形成2-细胞。
基于细胞内应变评估的卵母细胞去核方法及其在机器人化克隆中的应用 Article
孙明竹, 刘曜玮, 崔茂盛, 赵启立, 赵相飞, 张艺荻, 黄晶晶, 卢桂章, 赵新
《工程（英文）》 2023年 第24卷 第5期 页码 73-83 doi: 10.1016/j.eng.2022.04.016
自1996 年第一只克隆羊诞生，克隆技术由于在动物育种方面的巨大潜力而得到了很大关注。体细胞核移植技术是动物克隆的核心，其操作过程非常复杂，不可避免地造成细胞内损伤。通常来说，只有不到1%的重构胚胎能够发育成克隆动物，克隆的低成功率是制约其广泛应用的主要原因之一。为此，本文提
出了一种基于细胞内应变评估的卵母细胞去核方法，以减少体细胞核移植中的潜在细胞内损伤，从而提高克隆成功率。首先，根据细胞内速度场计算细胞内应变，进而将内应变作为评价标准来改进去核操作；在此基础上，开发了一套机器人批量体细胞核移植系统，用于实现机器人化克隆。实验结果表明，本文方法将体细胞核移植后的胚胎囊胚率从10.0%提高到20.8%，并成功获得17 头克隆小猪。这是世界上首批由机器人完成克隆操作获得的克隆动物。对比手动核移植操作，本文将克隆成功率从平均0.73%提升到了2.50%，大幅提升了克隆效率。与此同时，基于细胞内应变的去核方法有望应用于其他生物操作，并建立一种通用的减少细胞内损伤的细胞操作规范。
标题 作者 时间 类型 操作
Effects of enucleation method on
Chengcheng ZHAO, Junsong SHI, Rong ZHOU, Ranbiao MAI, Lvhua LUO, Xiaoyan HE, Hongmei JI, Gengyuan CAI, Dewu LIU, Enqin ZHENG, Zhenfang WU, Zicong LI
期刊论文
京公网安备 11010502051620号
