《1 前言》

1 前言

根据相关报导的有效作用剂量[1，2] ，本研究拟通 过观察在培养液中加入较大剂量的人参皂苷 CK （Ginsenoside，Gin CK）、淫羊藿苷（Icraiin，Icr）前、后 精子死亡率数据，了解其对体外精子死亡率的影 响，以便筛对两者安全选出疗效确切，药物成分明 确，药理机制透彻的中药单体制剂，减少患者和医 生的选择盲目性。

《2 资料和方法》

2 资料和方法

《2.1 资料》

2.1 资料

本院化验室检验用后废弃精液标本40份（经患者同意并经院伦理委员会批准），精子浓度少于 1.0×107 /mL的不纳入。

《2.2 方法》

2.2 方法

F-10培养液调整浓度为1.0×107 /mL，分别添加不同剂量的人参皂苷 CK（Ginsenoside，G 组 ； C36H62O18，分子量为622.87）、淫羊藿苷（Icraiin，I组； C33H40O15，分子量为676.65），按照不同浓度，G组分 为 500 μg/mL 组（G1组），100 μg/mL 组（G2），I 组分 为500 μg/mL（I1组），100 μg/mL（I2组）；设不添加任 何物质的F-10组（F组）为阴性对照组，34 ℃培养24 h 后分别检查各组精子死亡率。

《2.3 检测方法》

2.3 检测方法

人参皂苷CK，水溶性VE用F-10培养液溶解后使用；淫羊藿苷用先用二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide 或 DMSO）溶解，在使用前用添加至 F-10 液使 用；死亡率（伊红染色，Eosin）参照《世界卫生组织人 类精液检查与处理实验室手册》第五版[3] 精子死亡 率检测方法。

《2.4 试剂、仪器设备及软件》

2.4 试剂、仪器设备及软件

Gin CK（美仑生物），Icr（美仑生物），伊红（Sigma），DMSO（永大），其他国产分析纯、离心机（国 产）、移液器（国产）、全自动精子分析系统（Proiser）、 Nikon ECLIPSE E200（Nikon）。

《2.5 数据统计》

2.5 数据统计

SPSS13.0 软件包进行数据处理，检测数据用 Mean±s表示，对多组比较采用方差分析检验，检验 水准α= 0.05。

《3 试验结果》

3 试验结果

1）培养24 h后，I2 组死亡率为41.31±17.49，F组 死亡率为47.50±19.85，G2组死亡率为55.75±24.93， I3组死亡率为 58.05±19.06，G1组死亡率为 98.84± 1.62。

2）精子死亡率从低到高分别是I2组、F组、G2组、 I1组、G1组，各组经伊红染色后的死亡率有显著差异 （P<0.05），见表1。

《表1》

表1 精子死亡率及排序（由低到高）

Table 1 The values of mortality for human semen （from low to high）

《4 讨论》

4 讨论

中药治疗男性不育方面的药物及组方很多，但 由于中医药的药物成分复杂，作用靶点多，药物作 用机理难以明确[4] ，而中药单体的研究相对容易，因 此，中药单体治疗男性不育的研究逐渐成为男科临 床的热点之一[5] 。中医认为，男性不育以虚证为主， 多施以温补之药，人参和淫羊藿是男科临床的常用 药物，其中的有效成分主要是人参皂苷和淫羊藿苷，动物研究表明在改善精子质量方面具有良好疗 效[6] ，但是有关二者单体成分的致死剂量即单位体 积的最大负荷剂量未见报导，药物安全性方面的研 究也多未涉及。

Gin是人参中的主要活性成分，Gin CK是天然 的二醇型人参皂苷在人肠道内的代谢产物，是人参 在体内发挥活性的实体[7] ，且有良好的水溶性。研 究表明[8] ，Gin CK是一个多靶点、高活性化合物，有 研究表明其在抗肿瘤、抗炎、保肝和抗过敏方面体 现了良好的活性，而且在神经系统及免疫系统方面 也具有很好的调节作用[9] 。淫羊藿是男科临床治疗 不育症的常用药[10] ，现代药理实验研究表明，淫羊藿 能增加血管血流量、促进造血功能、免疫功能及代 谢，具有抗衰老、抗肿瘤等功效[11] ，Icr是淫羊藿的主 要活性成分，是现代男科药物研究领域的主要对象 之一[12] ，由于难溶于水，其作为细胞生物学领域的研 究对象时多用二甲基亚砜溶解后使用。

根据文献[13]报道，集既往经验，不同个体精子 的精子活动率相差悬殊，即使同一个体，同一标本， 同一分析人员，同一精子分析系统做出的结果往往 有较大误差，特别是该标本精子活动率较高时，在 短时间内做体外培养时（特别是培养液中的药物作 用相近时）该种误差减少程度有限，而当培养 24 h 以上时，不同药物及剂量下的精子活动率减少有显 著差异，可有效避免相关统计误差，伊红染色观察 精子死亡率简单快速，一般误差较小，培养时间的 选择和死亡率方法的正确选择有助于提高统计结 果的准确性。

本次项目通过对Gin CK、Icr等药物单体成分的 进行深入的临床研究，观察了其在体外对精子质量 的影响：a. 较大剂量的Gin CK、Icr，均可引起体外培养 的精子死亡率增高，在0.1 mg/mL的浓度下的Gin CK 对精子的致死作用已经比较明显，而0.5 mg/mL对体 外培养精子来说是致死剂量（98.84 %），在0.1 mg/mL 的剂量下的淫羊藿苷对精子的致死作用并不明显， 在0.5 mg/mL剂量下Icr对精子致死作用开始显现； b. Icr对精子的细胞毒性作用非常微弱，而大剂量的 Gin CK对精子的细胞毒性作用非常显著。